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技術(shù)文章

[色譜柱的使用]大賽璐手性柱使用說(shuō)明（二）

大家好

本期給大家介紹的是

大賽璐多糖涂敷反相分析用手性柱

在HPLC系統(tǒng)的使用說(shuō)明及注意事項(xiàng)

多糖涂敷型反相手性柱與上一期介紹的

多糖涂敷型正相手性柱

雖然具有相同的手性填料

但是后期工藝不同

所適用的流動(dòng)相體系也有所不同

多糖涂敷型正相柱不耐受水

多糖涂敷型反相柱可以耐水

即適用于“水-有機(jī)溶劑”的反相流動(dòng)相體系

在大賽璐手性柱柱盒內(nèi)有

出廠的英文原版說(shuō)明書(shū)和中文補(bǔ)充說(shuō)明書(shū)

請(qǐng)使用前務(wù)必仔細(xì)閱讀

若說(shuō)明書(shū)不慎遺失可在大賽璐官網(wǎng)進(jìn)行下載

（詳見(jiàn)文末）

現(xiàn)在就正式開(kāi)始帶著大家一起

了解手性柱使用流程


適用型號(hào)

CHIRALPAK®

AD-RH/AD-3R

CHIRALCEL®

OD-R/OD-RH/OD-3R

CHIRALPAK®

AS-RH/AS-3R

CHIRALCEL®

OJ-RH/OJ-3R

CHIRALPAK®

AY-RH/AY-3R

CHIRALCEL®

OZ-RH/OZ-3R

CHIRALPAK®

AZ-RH/AZ-3R

CHIRALCEL®

OX-RH/OX-3R



注意

事項(xiàng)

1

強(qiáng)堿性的添加劑或樣品溶液不能進(jìn)涂敷型反相手性色譜柱，以免破壞色譜柱硅膠。

2

涂敷型反相手性柱適合分離水溶性樣品、含水制劑，或者要求使用反相條件(如需用到MS檢測(cè))的樣品等。要避免使用極端pH值，以防損傷固定相的硅膠基質(zhì)。

3

涂敷型反相手性柱在使用緩沖液后，務(wù)必沖洗干凈后再保存。


手性柱使用前


1

明確手性柱當(dāng)前的使用溶劑


圖｜柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)【Column description】

新柱

新柱查閱柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)【Column description】

舊柱

與上一次手性柱使用人確認(rèn)

?

新的色譜柱初次使用，需確認(rèn)色譜柱的運(yùn)送保存溶劑(詳見(jiàn) Shipping solvent)，如流動(dòng)相與保存溶劑互溶，可直接使用，一般不需要對(duì)柱子進(jìn)行“活化”。


2

明確儀器當(dāng)前使用的溶劑



圖｜柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)【CAUTION】


將色譜柱接到色譜儀之前，請(qǐng)根據(jù)液相系統(tǒng)中的流動(dòng)相，必須先用合適的溶劑沖洗流路（包括流通閥和定量環(huán)）。


  • 液相系統(tǒng)之前使用的是含鹽的水相流動(dòng)相
    先用蒸餾水或去離子水沖洗系統(tǒng)，置換之前的含鹽流動(dòng)相；再用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，置換水。
  • 液相系統(tǒng)之前使用的是正相流動(dòng)相
    先用異丙醇或乙醇沖洗系統(tǒng)，置換之前的流動(dòng)相；
    再用蒸餾水或去離子水沖洗系統(tǒng)，置換乙醇；
    *后用流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)，置換水。
*建議沖洗體積至少是60mL

3

明確手性柱將要使用的溶劑

圖｜柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)【CAUTION】

① 禁用溶劑：丙酮、氯仿、二甲基甲酰胺、二甲基亞砜、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氫呋喃等

禁用溶劑即使存在微量，也會(huì)破壞手性固定相。

?

如果使用的是自動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣間隔的沖洗液也必須更換成合適的溶劑。

② 色譜柱運(yùn)行流動(dòng)相之前的操作
使用含鹽溶液或緩沖液的流動(dòng)相時(shí)，請(qǐng)勿直接讓目標(biāo)流動(dòng)相通過(guò)柱子，須按以下操作進(jìn)行：
1) 液相系統(tǒng)先置換成(不含鹽溶液或緩沖液)水(HPLC級(jí))和有機(jī)相混合溶液(比例同流動(dòng)相)，充分置換后，將流速調(diào)至0.5ml/min；
2) 連接色譜柱進(jìn)口，待看到色譜柱出口有液體流出時(shí)，將出口與檢測(cè)器連通；
3) 沖洗10-20分鐘后，再換成目標(biāo)流動(dòng)相。

手性柱使用中


操作條件

請(qǐng)參閱柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)

【Operating conditions】



流動(dòng)相方向

色譜柱標(biāo)簽上的指示

壓力限制*

10μm：建議3Mpa下使用

*高耐壓10Mpa

5μm：建議6Mpa下使用

*高耐壓30Mpa

3μm：建議15Mpa下使用

*高耐壓30Mpa

柱溫

0 ~40°C

※ pH>7.0時(shí)請(qǐng)?jiān)?-25℃內(nèi)使用

pH范圍

pH 2.0~9.0

禁止使用pH大于9的強(qiáng)堿性流動(dòng)相

否則會(huì)損傷硅膠填料


*說(shuō)明1：壓力是指由手性色譜柱本身引起的壓力。其值為總壓(液相體系+色譜柱)與液相體系(不接色譜柱時(shí))壓力之差。

*說(shuō)明2：以上建議壓力來(lái)源于大賽璐上海實(shí)驗(yàn)室使用經(jīng)驗(yàn)



分析條件

請(qǐng)參閱柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)

【Operating procedure】

如需了解手性柱方法開(kāi)發(fā)策略

可咨詢Daicel授權(quán)代理商-

廣州綠百草

圖片
圖片

圖｜英文原版說(shuō)明書(shū)【Operating conditions】

向下滑動(dòng)查看所有內(nèi)容


手性柱使用后


請(qǐng)參閱柱盒內(nèi)英文原版說(shuō)明書(shū)

【Column care/Maintenance】



圖｜英文原版說(shuō)明書(shū)【Column care/Maintenance】

手性柱的沖洗

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，如擔(dān)心色譜柱上吸附了一些未洗脫的化合物污染，先用不含任何鹽或緩沖鹽的流動(dòng)相沖洗，再用100%乙腈以0.3ml/min的流速?zèng)_洗2個(gè)小時(shí)。如果未洗脫的化合物更易溶解于甲醇中，則將上述沖洗溶劑換成甲醇。


*以上流速推薦，主要是針對(duì)4.6mm內(nèi)徑柱，其他規(guī)格柱，請(qǐng)按照說(shuō)明書(shū)推薦的流速進(jìn)行沖洗或咨詢大賽璐色譜柱技術(shù)支持。


為避免高柱壓對(duì)柱子填料的沖擊，沖洗時(shí)需控制流速。一般地：

對(duì)于5μm粒徑柱，沖洗時(shí)柱壓推薦不超過(guò)5MPa；

對(duì)于3μm粒徑柱，沖洗時(shí)柱壓推薦不超過(guò)15MPa。

將色譜柱切換至100%乙腈或甲醇前，必須把液相系統(tǒng)和色譜柱中的鹽置換完全，以免發(fā)生鹽析。


當(dāng)色譜柱出現(xiàn)柱效下降、柱壓升高等異常情況，但常規(guī)沖洗方法沒(méi)有改善時(shí)，可以參照柱盒內(nèi)中文補(bǔ)充說(shuō)明中的特殊方法進(jìn)行沖洗。
圖片

向下滑動(dòng)查看所有內(nèi)容

手性柱的保存

色譜柱從液相儀器上取下前，需用不含任何鹽或緩沖溶液的流動(dòng)相(例如水/乙腈 60:40 (v/v))將鹽徹底置換。


若一周以上不使用色譜柱，請(qǐng)將柱子保存再不含任何鹽的中性溶劑中(在耐受范圍內(nèi)的溶劑)，例如：使用水/乙腈 60:40(v/v)來(lái)保存色譜柱。


 技術(shù)支持


若在使用過(guò)程中，出現(xiàn)手性柱分離異常或柱壓過(guò)高等異?，F(xiàn)象發(fā)生時(shí)，請(qǐng)及時(shí)與大賽璐的授權(quán)代理商廣州綠百草聯(lián)系。

Tel：400-883-9117


廣州綠百草科學(xué)儀器有限公司
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